摘要： 为获得猪圆环病毒Ⅱ型ORF3编码蛋白,研究该蛋白的特性及功能,根据GenBank数据库中PCVⅡ的基因组序列设计引物,利用PCR从病料基因组DNA中扩增PCVⅡ河南地方株ORF3,将其克隆至表达载体pET-32a中进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测重组蛋白表达情况,采用Ni+NTA亲和纯化表达产物,透析复性后免疫日本大白兔制备多抗血清,并采用ELISA和Western blot方法检测多抗血清的效价和特异性。结果显示,PCR扩增获得全长315bp的ORF3,重组质粒经测序和双酶切证实构建正确;SDS-PAGE结果显示,ORF3能够在大肠杆菌中表达,产物的分子量约为30ku,以包涵体形式存在;纯化的重组蛋白具有较好的抗原性,制备的多抗血清抗体效价达1∶12 800以上,抗体特异性高,能与表达的ORF3编码蛋白结合。成功克隆了PCVⅡ河南地方株ORF3并实现原核表达,获得纯化的重组ORF3编码蛋白。 

关键词: 猪圆环病毒Ⅱ型, ORF3, 原核表达, 多抗血清