Journal of Henan Agricultural Sciences ›› 2013, Vol. 42 ›› Issue (6): 143-148.
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王琰1，张志敏1*，王军1，张琨1，訾静1，万一1，王燕1，张继生2，高建新3
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摘要： 为了实现耐有机溶剂脂肪酶基因的真核表达,参照GenBank公布的脂肪酶基因序列设计简并引物,通过PCR扩增出G.geotrichumSXL-107的全长1 692bp、编码563个氨基酸的脂肪酶基因lipI,基因登录号为JX074060。利用Signal P 3.0软件对lipI基因序列进行分析,将去除自身信号肽的成熟lipI基因克隆到诱导型表达载体pPIC9K上,构建胞外重组表达载体pPIC9K li-pI,转化毕赤酵母KM71,发酵培养72h,发酵上清液中脂肪酶活力达到70U/mL,与野生型脂肪酶产生菌Galactomyces geotrichum SXL 107相比,脂肪酶活力提高7倍。获得的重组脂肪酶的最适温度40℃、pH值为6.5,在10%的甲醇溶液中作用48h后仍然保持60%以上的酶活力。
关键词: 耐有机溶剂, 脂肪酶基因, 毕赤酵母, 表达
王琰，张志敏，王军，张琨，訾静，万一，王燕，张继生，高建新. 耐有机溶剂脂肪酶基因lipI的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达[J]. 河南农业科学, 2013, 42(6): 143-148.
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