Journal of Henan Agricultural Sciences ›› 2011, Vol. 40 ›› Issue (1): 136-140.
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刘明1,2，张改平2，肖治军2，郭军庆2，乔松林2，王丽2，史西保2，刘运超1,2，游雷鸣1,2，王爱萍1*
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摘要： 从猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)河南分离株(HN07-1、HN07-2)的细胞培养物中提取RNA,根据参考株IAF-exp91 N蛋白基因序列设计出2对引物,成功克隆出ORF7全长基因,并连接至pMD-19T载体。基因测序结果表明,2株PRRSV河南分离株ORF7基因序列完全相同;该序列与HB-4(hs)同源性为100%,与标准美洲株VR-2332和我国早期分离的BJ-4株同源性为93.8%。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1后,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达条件进行优化。SDS-PAGE和Western-blot结果表明,成功表达了约40 kD的融合蛋白;使用1.0 mmol/L的IPTG在2×YT培养基中诱导8 h可获得最大表达量。
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征, 反转录, 克隆, 表达, Western-blot, 美洲型
刘明，张改平，肖治军，郭军庆，乔松林，王丽，史西保，刘运超，游雷鸣，王爱萍. PPRSV河南株ORF7基因的克隆表达及条件优化[J]. 河南农业科学, 2011, 40(1): 136-140.
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