家蚕Gloverin 2 克隆、高效表达及其抗核型多角体病毒感染作用研究

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2023.08.015

摘要/Abstract

摘要： 为获得家蚕抗菌肽葛佬素2（BmGloverin 2），并研究其在家蚕抗核型多角体病毒（BmNPV）感染过程中的作用，以经BmNPV诱导的3龄3日家蚕中肠cDNA为模板，根据GenBank上BmGloverin 2 基因序列设计特异性引物，克隆出去除信号肽部分（1—18 aa）的BmGloverin 2 基因，与表达载体pET-28a（+）连接构建pET28a（+）-BmGloverin 2，对含有pET28a（+）-BmGloverin 2 重组质粒的菌株诱导表达，然后对抗菌肽重组蛋白进行Ni-IDA亲和层析、透析及浓缩过滤以获得高浓度目的蛋白；并采用抑菌试验检测BmGloverin 2重组蛋白生物活性；最后，将具有生物活性的BmGloverin 2重组蛋白和BmNPV混合处理4 h后喂食家蚕，并以直接喂食BmNPV和无菌水处理为对照组，以检测BmGloverin 2对BmNPV感染家蚕的影响。结果显示，成功克隆BmGloverin 2 基因，并构建重组pET28a（+）-BmGloverin 2；在37 ℃、0.5 mmol/L IPTG条件下诱导表达可获得大量BmGloverin 2重组蛋白，经SDS-PAGE检测其分子质量为19.1 ku，与预期大小相符，经过纯化浓缩最终获得BmGloverin 2 重组蛋白；抑菌试验证明，重组BmGloverin 2蛋白具有生物活性；与BmNPV对照组相比，饲喂重组BmGloverin 2蛋白与BmNPV混合液处理组幼虫存活率提高。可见，BmGloverin 2在家蚕抵抗BmNPV侵染中发挥作用。

关键词: 家蚕, 抗菌肽, Gloverin, 表达, 核型多角体病毒, 抗病毒

Abstract: In order to obtain BmGloverin 2 and study its role in anti‑infection of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus（BmNPV），cDNA from 3 days of the third instar larvae midgut of Bombyx mori induced by BmNPV was used as template.Based on the sequence of BmGloverin 2 gene in GenBank，specific primers were designed.The BmGloverin 2 gene，without the signal peptide part（1—18 aa），was cloned and connected with the expression vector pET28a（+）to construct pET28a（+）‑BmGloverin 2 and the strain containing pET28a（+）‑BmGloverin 2 recombinant plasmid was induced to express proteins.To obtain high concentration of target protein，the recombinant antimicrobial peptide protein was then subjected to Ni‑IDA affinity chromatography，dialysis and concentrated filtration.The bioactivity of recombinant BmGloverin 2 protein was detected by bacteriostatic assay.Finally，the effects of BmGloverin 2 on BmNPV infection were tested by feeding silkworm with the recombinant BmGloverin 2 protein and BmNPV after mixed trreatment for 4 h，and feeding silkworkm directly with BmNPV and sterile water treatments were taken as the control groups.The results showed that the BmGloverin 2 gene was successfully cloned and the recombinant pET28a（+）‑BmGloverin 2 was constructed.The recombinant BmGloverin 2 protein was obtained by inducing expression at 37℃ and 0.5 mmol/L IPTG.The molecular weight of BmGloverin 2 was 19.1 ku according to SDS‑PAGE analysis，which was consistent with the expected size.Finally，the recombinant protein BmGloverin 2 was obtained by purification and concentration.The bacteriostatic test showed that the recombinant BmGloverin 2 protein had biological activity.Compared with the BmNPV control group，the larval survival rate was increased in the group fed with the mixture of recombinant BmGloverin 2 protein and BmNPV.The results suggest that BmGloverin 2 plays a role in the resistance of silkworm to BmNPV infection.

Key words: Bombyx mori, Antibacterial peptide, Gloverin, Expression, Nucleopolyhedrovirus, Antivirus

中图分类号:

S884

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