河南农业科学 ›› 2012, Vol. 41 ›› Issue (5): 129-132.

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大白菜非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的优化

梁宝萍1,原玉香2,朴凤植1,张晓伟2*,蒋武生2,梁 爽3,姚秋菊2, 张 强2,赵艳艳2   

  1. 1.河南农业大学 园艺学院,河南 郑州 450002; 2.河南省农业科学院 园艺研究所,河南 郑州 450008;3.郑州大学 生物工程系,河南 郑州 450000
  • 收稿日期:2011-12-20 出版日期:2012-05-15 发布日期:2012-05-15
  • 通讯作者: 张晓伟(1965-),男,河南平舆人,研究员,博士,主要从事蔬菜生物技术及遗传育种研究。E-mail:xiaowei5737@163.com
  • 作者简介:梁宝萍(1987-),女,青海互助县人,在读硕士研究生,研究方向:分子遗传育种。E-mail:liangbaoping888@163.com
  • 基金资助:
    河南省创新杰出人才计划(094200510016);国家大宗蔬菜产业技术体系(CARS-25-G-27)

  • Received:2011-12-20 Published:2012-05-15 Online:2012-05-15

摘要: 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的检测效果受到凝胶聚合速度、片段迁移率等多种因素影响。以大白菜为供试材料,研究比较了凝胶聚合速度及PCR产物在不同浓度凝胶上的检测效果。不同浓度的凝胶是由2种〔40%(19∶1)和30%(29∶1)〕贮存液分别配制的4种浓度(5%,7%,9%,11%)。结果表明,在4~30℃,凝胶聚合速度随温度的升高而加快;APS保持不变,不同温度下TEMED∶APS合适配比也不同:4℃(冬季)时,TEMED/APS的合适配比是1∶10,25℃(春秋)、30℃(夏季),选择1∶20的配比为宜;2种不同贮存液配制的相同浓度凝胶检测效果不同,30%(29∶1)优于40%(19∶1),由前者配制7%的凝胶上DNA片段分离效果好,带型清晰,分辨率高。

关键词: 非变性聚丙烯酰胺, 聚合速度, 贮存液, TEMED与 APS配比