河南农业科学 ›› 2017, Vol. 46 ›› Issue (3): 129-133.

• 畜牧·兽医 • 上一篇    下一篇

猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

李子祥1,邵春艳1,2*,徐 琦1,孙 静1,2,姜 胜1,2,何海建3,吴 媛3,王晓杜1,2,宋厚辉1,2**
  

  1. 1.浙江农林大学 动物科技学院,浙江 临安 311300;2.浙江农林大学 动物健康检测中心,浙江 临安 311300;3.金华职业技术学院 农业与生物工程学院,浙江 金华 321007
  • 收稿日期:2016-09-26 出版日期:2017-03-15 发布日期:2017-03-15
  • 通讯作者: 宋厚辉(1975-),山东青岛人,研究员,博士,主要从事动物预防医学与公共卫生方面的研究。E-mail:songhh@zafu.edu.cn
  • 作者简介:李子祥(1995-),浙江台州人,在读本科生,研究方向:动物预防医学。E-mail:526874501@qq.com*表示同等贡献作者
  • 基金资助:
    浙江省公益性研究农业项目(2016C32065);金华市重点研发项目(2014-2-003,2016-2-013);浙江农林大学人才启动项目(2012FR047);浙江省大学生新苗人才项目(2016R412008)

  • Received:2016-09-26 Published:2017-03-15 Online:2017-03-15

摘要:  针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的保守序列设计引物,以TEGV疫苗毒株为模板,克隆S基因,并构建重组阳性质粒,优化反应体系和扩增条件,建立基于SYBR Green Ⅰ染料的实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、重复性和灵敏度进行分析。结果显示:建立的检测方法灵敏度可达10拷贝/μL,标准曲线线性关系良好 (r=0.997),扩增效率高,具有良好的特异性和重复性。使用该方法对124份临床疑似TGEV病料进行检测,阳性样本有17份,检测样本的阳性率为13.7%。该方法可用于兽医临床上TGEV的快速检测和流行病学分析。

关键词: 猪传染性胃肠炎, 实时荧光定量PCR, 特异性, 敏感性