重组酶Xar的表达纯化及性质研究

河南农业科学 ›› 2016, Vol. 45 ›› Issue (5): 140-143,147.

重组酶Xar的表达纯化及性质研究

王锐丽¹,叶兆伟¹,薛业敏²

1.信阳农林学院生物与制药工程学院，河南信阳 464000； 2.南京师范大学金陵女子学院，江苏南京 210097

收稿日期:2015-08-06 出版日期:2016-05-15 发布日期:2016-05-15
作者简介:王锐丽(1985-)，女，河南信阳人，讲师，硕士，主要从事微生物学研究。E-mail:wrl0376@163.com
基金资助:
河南省科技攻关项目(132102110047)

Received:2015-08-06 Published:2016-05-15 Online:2016-05-15

摘要/Abstract

摘要： 为获得高效的半纤维素类饲料酶制剂，将含嗜热厌氧乙醇菌α-阿拉伯糖苷酶/木糖苷酶(Xar)基因的重组质粒pET-20b-xar导入大肠杆菌DH10B中，经IPTG诱导进行高效表达，将表达的重组酶进行热处理和Ni²⁺亲和层析纯化，并对纯化的重组酶Xar的性质进行研究。结果表明，以对硝基苯酚-α-阿拉伯呋喃糖苷(pNPAF)为底物，重组酶X_ar的最适反应温度和最适pH值分别是75～80 ℃和6.0，米氏常数(K_m)、最大反应速度(V_max)分别为2.42 mmol/L、20.7 μmol/(min·mg)；以对硝基苯酚-β-木糖苷(pNPX)为底物，重组酶X_ar的最适反应温度和最适pH值分别为93 ℃和5.8～6.2，K_m、V_max值分别为0.60 mmol/L、43.8 μmol/(min·mg)。将重组酶Xar置于80 ℃保温1 h，木糖苷酶的相对活性仍为56.4%，在pH值4.2～8.2条件下仍保持较高的稳定性。当木糖浓度达到400 mmol/L时，木糖苷酶的相对活性仍有97.9%。Mn²⁺对重组酶Xar有明显的激活作用，而Cu²⁺和Zn²⁺对其有明显的抑制作用。可见，重组酶Xar具有良好的热稳定性。

关键词: 木糖苷酶, 耐热性, 纯化, 酶学性质

王锐丽,叶兆伟,薛业敏. 重组酶Xar的表达纯化及性质研究[J]. 河南农业科学, 2016, 45(5): 140-143,147.

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