河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (5): 97-101.

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抗有机磷农药单链抗体cDNA文库的构建与鉴定

  

  1. 1.重庆科技学院 化学化工学院,重庆 401331;2. 重庆大学 城市建设与环境工程学院,重庆 400045
  • 收稿日期:2013-10-11 出版日期:2014-05-15 发布日期:2014-05-15
  • 作者简介:罗义辉(1966-),男,四川武胜人,讲师,博士,主要从事有害化学品快速检测研究。E-mail:383620115@qq.com
  • 基金资助:
    教育部博士点基金项目(20090191110031)

  • Received:2013-10-11 Published:2014-05-15 Online:2014-05-15

摘要: 为了获得针对不同有机磷农药的单链抗体,以人工合成的2种有机磷农药(杀螟硫磷和毒死蜱)抗原免疫小鼠,测定抗血清效价后,提取小鼠脾细胞总RNA,设计引物,通过RT-PCR扩增得到片段大小分别约为400 bp和700 bp的小鼠重链、轻链可变区基因,再利用融合PCR连接重链轻链可变区,构建抗有机磷的单链抗体cDNA文库,片段约为1 100 bp。将构建的cDNA文库与pMD18-T载体连接并转化大肠杆菌DH5α,测序分析表明,所构建的文库片段互补决定区序列变化明显,多样性好,为进一步筛选抗有机磷的高特异性、高亲和力单链抗体奠定了基础。

关键词: 有机磷农药, 抗原, 单链抗体, cDNA文库