Journal of Henan Agricultural Sciences ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (12): 134-139.

Received:2014-07-12 Published:2014-12-15 Online:2014-12-15

稳定表达靶向BVDV shRNA细胞系的建立及其对BVDV复制的影响

范璐¹，王丽¹，史西保^1,2，樊剑鸣³，王爱萍⁴，张改平^1,5*

收稿日期：2014-07-12

基金项目：国家自然科学基金项目（31302073）；河南省农业科学院自主创新专项基金

作者简介：范璐（1986-），女，上海崇明人，在读硕士研究生，研究方向：动物病毒分子致病机制。

E-mail:632038636@qq.com

﹡通讯作者：张改平（1960-），男，河南内黄人，研究员，中国工程院院士，博士，主要从事动物免疫学与动物因病快速诊断研究。E-mail:zhanggaiping2003@yahoo.com.cn

1.河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室，河南郑州 450002；2. 河南师范大学生命科学学院，河南新乡 453007； 3. 郑州大学公共卫生学院，河南郑州450001；4. 郑州大学生物工程系，河南郑州 450001；5.河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002）

通讯作者: 张改平（1960-），男，河南内黄人，研究员，中国工程院院士，博士，主要从事动物免疫学与动物因病快速诊断研究。E-mail:zhanggaiping2003@yahoo.com.cn
作者简介:范璐（1986-），女，上海崇明人，在读硕士研究生，研究方向：动物病毒分子致病机制。E-mail: 632038636@qq.com
基金资助:

国家自然科学基金项目（31302073）；河南省农业科学院自主创新专项基金项目（2013zz48）

Abstract

摘要： 为研究靶向牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的shRNA对BVDV复制的影响,利用脂质体介导法将BVDV shRNA真核表达质粒pSGH1-sh1083和pSGH1-sh8235及对照质粒pSGH1转染MDBK细胞,通过G418抗性以及有限稀释法筛选获得BVDV shRNA单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235及对照细胞系subclonepshmock。通过观察其细胞病变效应(CPE)、测定TCID50及RT-PCR、流式细胞术检测BVDV shRNA细胞系对BVDV复制的影响。结果表明,与阴性对照组相比,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV 72h后CPE不明显,其TCID50低于阴性对照组;RT-PCR结果显示,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV后病毒E2基因的表达减弱;流式细胞术检测不同细胞系接毒24h后的结合率,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235与病毒结合率分别为11.37%和11.51%,与对照组(20.25%)相比有所降低。综上,稳定转染BVDV shRNA的单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235对BVDV的复制具有抑制作用。

关键词: RNA 干扰, 牛病毒性腹泻病毒, 短发夹RNA, 单克隆细胞系, 复制

范璐，王丽，史西保，樊剑鸣，王爱萍，张改平. 稳定表达靶向BVDV shRNA细胞系的建立及其对BVDV复制的影响[J]. 河南农业科学, 2014, 43(12): 134-139.

稳定表达靶向BVDV shRNA细胞系的建立及其对BVDV复制的影响

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