摘要： 为阐明DNA甲基化对奶牛乳腺泌乳功能调控的机制,研究了甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)对奶牛乳腺上皮细胞中PPARγ基因启动子甲基化状态及其表达的影响,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,采用0.1、0.5、1.0、5.0μmol/L的5-Aza-dC对奶牛乳腺上皮细胞进行处理,用EpiQuikTMDNA methyltransferase assay试剂盒进行甲基转移酶活性检测,采用CASY细胞分析仪检测细胞活力和增殖能力,利用亚硫酸氢盐测序(BSP)技术检测了PPARγ启动子的甲基化特征,qRT-PCR法检测PPARγmRNA表达的变化,Western blot检测PPARγ蛋白表达的变化。结果显示:与空白对照组相比,0.1μmol/L的5-Aza-dC对奶牛乳腺细胞生长无毒性,处理96h甲基转移酶活性极显著降低,奶牛乳腺细胞的PPARγ基因启动子甲基化程度降低,PPARγ表达升高。表明5-Aza-dC可降低奶牛乳腺细胞中PPARγ启动子区域的甲基化程度,促进PPARγ表达。

关键词: 5&ndash, 氮杂&ndash, 2'&ndash, 脱氧胞苷, 奶牛乳腺上皮细胞, PPAR&gamma, 基因, DNA甲基化