为了丰富梨分子遗传图谱的SSR标记,以鸭梨、京白梨及鸭梨×京白梨的实生后代为试材,对影响梨SSR技术PCR反应体系中的模板DNA用量、Mg2＋浓度、dNTP浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量以及每对引物的退火温度进行了探索,确立了适宜梨的SSR反应体系,即在20μL反应体系中,模板DNA用量为30 ng,Mg2＋、dNTP和引物的最适浓度分别为1.2 mmol/L、0.15 mmol/L、0.8μmol/L。TaqDNA聚合酶的最适用量是1.0 U。最后利用该反应体系筛选出了19个适宜梨遗传分析的SSR引物,引物的最佳退火温度为49~55℃,通过8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测,表明该反应体系扩增的多态性条带清晰稳定可靠。
