鸡胚成纤维细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建和鉴定

河南农业科学 >

2008 , Vol. 37 >Issue 7: 100 - 103

DOI: https://doi.org/10.3969/j.issn.1004-3268.2008.07.032

鸡胚成纤维细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建和鉴定

赵绪永 ,
张改平 ,
朱礼倩 ,
李清州

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¹河南农业大学,河南郑州450002;²河南省农业科学院,河南郑州450002;³郑州牧业工程高等专科学校,河南郑州450011

网络出版日期: 2008-07-15

基金资助

国家自然科学基金（30671561）

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摘要

构建鸡胚成纤维细胞（CEF）T7噬菌体表达型cDNA文库,为筛选和研究CEF上病毒受体分子奠定基础。提取纯化CEF的mRNA,反转录合成双链cDNA,补平末端,连接EcoRⅠ/HindⅢ接头,双酶切,凝胶过滤层析除去小于400bp的cDNA片段,合成双链cDNA定向与T7噬菌体左右臂连接,体外包装后建成cDNA表达文库。测定文库大小、重组率,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小。结果表明,构建的cDNA文库滴度为2.2×107pfu/mL、扩增后滴度为3.5×1010pfu/mL,重组效率达98%、插入片段多在0.4～3kb之间,平均插入片段长约1.3kb。表明所建文库具有很高的质量,从而为筛选目的cDNA克隆奠定了基础。

关键词： 鸡胚成纤维细胞(CEF); T7噬菌体; cDNA表达文库

本文引用格式

赵绪永 , 张改平 , 朱礼倩 , 李清州 . 鸡胚成纤维细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建和鉴定[J]. 河南农业科学, 2008 , 37(7) : 100 -103 . DOI: 10.3969/j.issn.1004-3268.2008.07.032

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