干扰素对猪伪狂犬病毒增殖的影响

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.05.018

河南农业科学 ›› 2021, Vol. 50 ›› Issue (5): 129-136.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2021.05.018

干扰素对猪伪狂犬病毒增殖的影响

李聪聪^1,2,3，张世军⁴，王红彩¹，张依盼¹，霍永¹，姜东凤¹，宋素芳^1,2，牛晖^1,3，姬向波⁵，李婉涛^1,2,3

（1.河南牧业经济学院动物科技学院，河南郑州 450046；2.河南省畜禽遗传资源保护工程技术研究中心，河南郑州 450046；3.郑州市动物生殖分子调控重点实验室，河南郑州 450046；4.河南农业大学动物医学院，河南郑州 450046；5.河南省非常规饲料资源创新利用重点实验室，河南郑州 450046）

收稿日期:2020-10-22 出版日期:2021-05-15 发布日期:2021-05-15
通讯作者: 李婉涛（1964-），女，河南南阳人，教授，硕士，主要从事动物遗传育种研究。E-mail:wantao1128@126.com
作者简介:李聪聪（1985-），女，河南郑州人，讲师，博士，主要从事动物抗病育种研究。E-mail:congcong_925520@126.com
基金资助:
国家自然科学青年基金项目（31702102）；河南牧业经济学院博士启动资金项目（53000065）；郑州市1125创新领军人才项目（2016XL003）

Effects of Interferons on the Proliferation of Porcine Pseudorabies Virus

LI Congcong^1,2,3,ZHANG Shijun⁴,WANG Hongcai¹,ZHANG Yipan¹,HUO Yong¹,JIANG Dongfeng¹,SONG Sufang^1,2,NIU Hui^1,3,JI Xiangbo⁵,LI Wantao^1,2,3

(1.College of Animal Science and Technology,Henan University of Animal Husbandry and Economy,Zhengzhou 450046,China;2.Henan Livestock and Poultry Genetic Resources Protection Engineering Technology Research Center,Zhengzhou 450046,China;3.Zhengzhou Key Laboratory of Animal Reproductive Molecular Regulation,Zhengzhou 450046,China;4.College of Veterinary Medicine,Henan Agricultural University,Zhengzhou 450046,China;5.Henan Key Laboratory of Innovation and Utilization of Unconventional Feed Resources,Zhengzhou 450046,China)

Received:2020-10-22 Published:2021-05-15 Online:2021-05-15

摘要/Abstract

摘要： 为了探讨干扰素（IFN）的抗病毒机制，构建pcDNA3.1-IFNα、pcDNA3.1-IFNβ、pcDNA3.1-IFNγ3个重组表达载体，分别转染PK15细胞，并以pcDNA3.1空载体作为对照（NC），24 h后以感染复数（MOI）为1接种猪伪狂犬病毒（PRV）HNJY株，然后分别在接毒后24、36、48 h收细胞。提取细胞中病毒基因组DNA，采用实时荧光定量PCR（qPCR）的方法检测gD基因在各个时间点的表达量；提取细胞RNA，反转录后采用qPCR检测细胞因子IFNα、IFNβ、IFNγ、ISG15、IL6、IL1β和IL10的表达量。观察细胞表型变化，IFNγ试验组的PK15细胞感染PRV后细胞表型变化与对照组相类似，IFNα和IFNβ试验组的PK15细胞感染PRV后正常形态细胞更多。qPCR检测gD基因的表达量，结果表明，IFNα和IFNβ试验组gD基因的表达量较对照组均极显著上调（P<0.05）；IFNγ试验组gD基因的表达量在24、36 h均极显著低于对照组（P<0.01），在48 h差异不显著。qPCR检测细胞因子的表达量，结果显示，与对照组相比，试验组IFNα、IFNβ、IFNγ的表达量均极显著上调（P<0.01）；IFNα和IFNβ试验组能显著诱导ISG15的表达，但IFNγ试验组不能显著诱导ISG15的表达；IFNα、IFNβ和IFNγ试验组均能诱导IL6、IL1β的上调表达；IFNβ和IFNγ试验组能诱导IL10的上调表达，但IFNα试验组不能显著诱导IL10的表达。综上，不同干扰素通过调节机体不同细胞因子的表达影响PRV的增殖。

关键词: 猪伪狂犬病毒, 干扰素, 细胞因子, 调控, 表达

Abstract: In order to explore the antiviral mechanism of interferon(IFN),three recombinant expression vectors pcDNA3.1-IFNα,pcDNA3.1-IFNβ,pcDNA3.1-IFNγ were constructed and transfected into PK15 cells respectively,and pcDNA3.1 empty vector was used as negative control(NC).After 24 hours,the porcine pseudorabies virus(PRV) HNJY strain was inoculated with multiple infection(MOI) of 1,and then the cells were harvested at 24,36 and 48 h after inoculation.Viral genomic DNA was extracted from the cells,and the expression of gD at each time point was detected by real time fluorescence quantitative PCR (qPCR). Cell RNA was extracted,and qPCR was used to detect the expression levels of cytokines IFNα,IFNβ,IFNγ,ISG15,IL6,IL1β and IL10 after reverse transcription.The morphological changes of PK15 cells were observed.Compared with the control group,the morphological changes of PK15 cells overexpressing IFNγ were similar after PRV infection.PK15 cells overexpressing IFNα/IFNβ had more normal cells after infection with PRV.The transcription of gD in the cells transfected with IFNα,IFNβ and IFNγ was detected by qPCR.The results showed that the transcription of gD in the IFNα and IFNβ groups was significantly up-regulated compared with the control group(P<0.05);the transcription of gD in IFNγ transfection group was extremely significantly lower than that of control group at 24 and 36 h(P<0.01),but the difference was not significant at 48 h.The relative expression levels of IFNα,IFNβ,IFNγ,ISG15,IL6,IL1β and IL10 were detected by qPCR.Compared with the control group,the expression levels of IFNα,IFNβ,IFNγ were all extremely significantly up-regulated(P<0.01).After PRV challenge,IFNα and IFNβ groups could significantly induce the expression of ISG15,but the IFNγ group could not.IFNα,IFNβ and IFNγ groups could induce the up-regulated expression of IL6 and IL1β.IFNβ and IFNγ groups could induce the up-regulation of IL10 expression,but the IFNα group could not significantly induce the expression of IL10.Therefore, different interferons affect the proliferation of PRV by regulating the expression of different cytokines in the body.

Key words: Pseudorabies virus, Interferon, Cytokine, Regulation, Expression

中图分类号:

S852

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LI Congcong, ZHANG Shijun, WANG Hongcai, ZHANG Yipan, HUO Yong, JIANG Dongfeng, SONG Sufang, NIU Hui, JI Xiangbo, LI Wantao. Effects of Interferons on the Proliferation of Porcine Pseudorabies Virus[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences, 2021, 50(5): 129-136.

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