PPRSV河南株ORF7基因的克隆表达及条件优化

河南农业科学 ›› 2011, Vol. 40 ›› Issue (1): 136-140.

PPRSV河南株ORF7基因的克隆表达及条件优化

刘明^1,2，张改平²，肖治军²，郭军庆²，乔松林²，王丽²，史西保²，刘运超^1,2，游雷鸣^1,2，王爱萍^1*

1.郑州大学生物工程系，河南郑州 450001；2.河南省农业科学院，农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室，河南郑州 450002；

收稿日期:2010-09-26 出版日期:2011-01-15 发布日期:2011-01-15
通讯作者: 王爱萍（1970-），女，青海西宁人，副教授，硕士，硕士生导师，主要从事动物免疫学研究。E-mail：pingaw@126.com
作者简介:刘明（1985-），男河南商丘人，在读硕士研究生，研究方向：病原分子生物学。E-mail：xyliujinjin@126.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(30730068)

Received:2010-09-26 Published:2011-01-15 Online:2011-01-15

摘要/Abstract

摘要： 从猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)河南分离株(HN07-1、HN07-2)的细胞培养物中提取RNA,根据参考株IAF-exp91 N蛋白基因序列设计出2对引物,成功克隆出ORF7全长基因,并连接至pMD-19T载体。基因测序结果表明,2株PRRSV河南分离株ORF7基因序列完全相同;该序列与HB-4(hs)同源性为100%,与标准美洲株VR-2332和我国早期分离的BJ-4株同源性为93.8%。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1后,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达条件进行优化。SDS-PAGE和Western-blot结果表明,成功表达了约40 kD的融合蛋白;使用1.0 mmol/L的IPTG在2×YT培养基中诱导8 h可获得最大表达量。

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征, 反转录, 克隆, 表达, Western-blot, 美洲型

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