河南农业科学 ›› 2013, Vol. 42 ›› Issue (2): 123-127.

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多重实时定量PCR快速检测PRRSV、CSFV和PCV2混合感染方法的建立

赵绪永,宁豫昌,赵丽,马辉   

  1. 郑州牧业工程高等专科学校,河南 郑州 450011
  • 收稿日期:2012-09-19 出版日期:2013-02-15 发布日期:2013-02-15
  • 作者简介:赵绪永(1973-),男,河南新野人,讲师,博士,主要从事动物疫病分子病原学研究。E-mail:zhaoxy6888@163.com
  • 基金资助:
     河南省教育厅自然科学研究计划项目(2011A230016)

  • Received:2012-09-19 Published:2013-02-15 Online:2013-02-15

摘要: 根据TaqMan复合荧光探针设计原则,应用Primer 5.0和Oligo 6.0软件设计检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的特异性引物和探针,优化反应条件,建立了检测PRRSV、CSFV和PCV2的单项和多重Real-time PCR方法。结果表明,建立的方法具有高度特异性,与其他病原检测无明显交叉反应;对阳性质粒和病毒的最低检测量分别为<101个拷贝和<1TCID50/反应,检测灵敏度比常规PCR检测高100倍。通过对20份临床样本进行检测,多重Real-time PCR检测结果和单项Real-time PCR检测结果一致。建立的多重Real-time PCR方法可用于同时快速检测PRRSV、CSF和PCV2的混合感染,具有灵敏、特异、重复性好并能对样品进行定量检测等优点。

关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒, 猪瘟病毒, 猪圆环病毒2型, 多重实时定量PCR