河南农业科学 ›› 2019, Vol. 48 ›› Issue (6): 106-110.

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木槿ISSR-PCR反应体系的建立及优化

任雪羽,王晓红,肖 芬,周 英   

  1. (中南林业科技大学风景园林学院,湖南 长沙 410004)
  • 收稿日期:2018-12-20 出版日期:2019-06-15 发布日期:2019-06-15
  • 通讯作者: 王晓红(1974-),女,湖南双峰人,副教授,博士,主要从事风景园林与园林植物研究。E-mail:wxhznl@126.com
  • 作者简介:任雪羽(1994-),女,重庆开县人,在读硕士研究生,研究方向:园林植物与观赏园艺。E-mail:chris310119@126.com
  • 基金资助:
    国家林业局948项目(20150417);国家林业局风景园林学重点学科资助项目(林人发[2016]21号);湖南省教育厅“十二五”重点学科资助项目(2011-76)

  • Received:2018-12-20 Published:2019-06-15 Online:2019-06-15

摘要: 建立木槿ISSR-PCR反应体系,为木槿种质资源的创新与鉴定提供理论基础。采用正交试验法,对影响PCR结果的Taq酶用量、Mg2+浓度、dNTPs浓度、模板DNA用量及引物浓度5个因素进行分析,采用单因素试验对退火温度进行筛选,并利用最佳体系对24个木槿品种进行扩增验证。结果表明,最优反应体系(25 μL)中,含10×buffer(Mg2+ free) 2.5 μL、Taq酶0.75 U、Mg2+ 2.0 mmol/L、dNTPs 0.10 mmol/L、模板DNA 100 ng、引物0.5 μmol/L。PCR反应程序为94 ℃预变性2 min;94 ℃变性30 s,50 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,34 个循环;72 ℃延伸6 min,4 ℃保温。建立的体系对24个木槿品种能够扩增出清晰稳定、无拖带、多态性高的条带。

关键词: 木槿, ISSR-PCR, 反应体系