大肠杆菌外膜蛋白F的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析

河南农业科学 ›› 2019, Vol. 48 ›› Issue (03): 145-152.

大肠杆菌外膜蛋白F的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析

伍娜娜^1,2，康超^1,2，荣娜^1,2，刘祥^1,2，陈春琳^1,2，陈琛^1,2，丁锐^1,2，吴三桥^1,2

（1.陕西理工大学生物科学与工程学院/中德天然产物研究所，陕西汉中 723001； 2.陕西省天麻山茱萸工程技术研究中心，陕西汉中 723001）

收稿日期:2018-09-23 出版日期:2019-03-15 发布日期:2019-03-15
通讯作者: 刘祥（1983-），男，安徽合肥人，副教授，博士，主要从事蛋白质组学与免疫学研究。E-mail：liuxiang888525@163.com
作者简介:伍娜娜（1994-），女，陕西西安人，在读硕士研究生，研究方向：分子生物学。E-mail：wunana0413@163.com
基金资助:
陕西理工大学人才项目（SLGQD1803）；陕西省教育厅科学研究计划项目（17JK0137）；国家外国专家局项目（GDT20186100426）

Received:2018-09-23 Published:2019-03-15 Online:2019-03-15

摘要/Abstract

摘要： 为获得大肠杆菌外膜蛋白OmpF并对其耐药性功能进行研究，通过分子克隆技术构建OmpF蛋白重组表达菌株，利用正交试验法获得OmpF菌株的最佳培养条件和表达条件，采用SDS-PAGE电泳切胶纯化方法获得OmpF蛋白，免疫小鼠获得OmpF蛋白多克隆抗体，Western blotting方法检测多克隆抗体的特异性，使用DNAMAN 8.0与MEGA 5.0软件对OmpF蛋白进行同源性和系统发生分析。结果显示，PCR扩增获得1 089 bp的ompF基因，成功构建pET-32a-ompF载体，其诱导表达产物分子质量为38 ku，与预期大小一致。正交试验获得OmpF菌株的最佳培养条件为葡萄糖浓度为0，转速为230 r/min，装液量为50 mL；最佳表达条件为诱导时菌液OD₆₀₀为0.5，IPTG终浓度为0.1 mmol/L，诱导时间为8 h，温度为28 ℃。SDS-PAGE切胶纯化获得高纯度的OmpF蛋白后，利用Western blotting证实OmpF蛋白抗血清具有较好的特异性。OmpF蛋白序列系统发生分析发现，OmpF蛋白在不同种类的细菌中具有较高的同源性，OmpF蛋白产生的抗体可能为不同种细菌的感染提供交叉免疫保护作用，并且不同种类细菌中OmpF蛋白可能具有相似的分子功能。

关键词: 大肠杆菌, 外膜蛋白OmpF, 原核表达, 正交试验, 诱导条件, 生物信息学分析

伍娜娜，康超，荣娜，刘祥，陈春琳，陈琛，丁锐，吴三桥. 大肠杆菌外膜蛋白F的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析[J]. 河南农业科学, 2019, 48(03): 145-152.

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