利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎

河南农业科学 ›› 2019, Vol. 48 ›› Issue (2): 131-136.

所属专题：基因编辑系统专题

利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎

尉翔栋^1,2，吕晨晨^1,2，朱肖亭¹，冯亚杰¹，辛晓玲¹，施巧婷¹，梁瑞清³，徐照学^1,2，王二耀¹，滑留帅¹

（1.河南省农业科学院畜牧兽医研究所/河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室，河南郑州 450002； 2.河南农业大学牧医工程学院，河南郑州 450002； 3.郑州外国语学校，河南郑州 450001）

收稿日期:2018-07-02 出版日期:2019-02-15 发布日期:2019-02-15
通讯作者: 滑留帅（1982-），男，河南偃师人，助理研究员，博士，主要从事动物遗传育种与繁殖研究。E-mail:hualiushuai@qq.com 王二耀（1971-），男，内蒙古呼和浩特人，副研究员，博士，主要从事动物发育及胚胎工程研究。 E-mail:wangeryao666@qq.com
作者简介:尉翔栋（1994-），男，河南商丘人，在读硕士研究生，研究方向：家畜胚胎的体外生产与发育机制。E-mail:804133866@qq.com
基金资助:
国家肉牛牦牛产业技术体系项目（CARS-38）；河南省肉牛产业技术体系项目（S2013-08）；河南省农业科学院畜牧兽医研究所博士启动费项目（2016BSQD）；河南省农业科学院自主创新专项（2018ZC57）

Received:2018-07-02 Published:2019-02-15 Online:2019-02-15

摘要/Abstract

摘要： 为了给双肌肉牛品种的培育提供新的遗传素材，拟利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎。从采集到的86对牛卵巢中收集卵母细胞进行成熟培养以及体外受精，并使用在线软件设计能够在体外高效编辑牛MSTN基因的gRNA序列，将验证后所得的体外切割活性最高的gRNA与Cas9 mRNA的混合物显微注射牛的受精卵，培养至囊胚后，利用T7EI核酸内切酶法检测囊胚中MSTN基因的编辑情况，然后将基因编辑阳性的囊胚样品进行测序验证。结果表明，牛胚胎体外培养平均囊胚率为21.28%；在设计的多条gRNA序列中，gRNA5的体外切割活性最高，为96.00%；将Cas9 mRNA和gRNA5的混合物显微注射受精卵并培养至囊胚后，T7EI核酸内切酶检测表明囊胚MSTN基因切割阳性率为15.40%；对MSTN基因编辑囊胚阳性样品测序表明，在gRNA5靶位点存在部分片段缺失。综上，说明利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功获得了牛MSTN基因编辑胚胎。

关键词: font-family: 宋体, mso-bidi-font-family: 宋体, mso-bidi-font-size: 11.0pt, mso-ansi-language: EN-US, mso-fareast-language: ZH-CN, mso-bidi-language: AR-SA">牛;MSTN基因, 基因编辑, CRISPR-Cas9, 胚胎

尉翔栋，吕晨晨，朱肖亭，冯亚杰，辛晓玲，施巧婷，梁瑞清，徐照学，王二耀，滑留帅. 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎[J]. 河南农业科学, 2019, 48(2): 131-136.

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