当归MYB4转录因子基因的克隆及表达分析

河南农业科学 ›› 2018, Vol. 47 ›› Issue (12): 48-56.

当归MYB4转录因子基因的克隆及表达分析

杨雪¹，雒军²，杨彩霞¹，王振恒¹，夏琦²，王引权^1*

（1.甘肃中医药大学药学院，甘肃兰州 730000； 2.甘肃中医药大学科研实验中心，甘肃兰州 730000）

收稿日期:2018-05-14 出版日期:2018-12-15 发布日期:2018-12-15
通讯作者: 王引权（1963-），男，甘肃甘谷人，教授，博士，主要从事药用植物资源生理生态研究。E-mail:kjkfpp@163.com
作者简介:杨雪（1990-），女，河南开封人，在读硕士研究生，研究方向：药用植物资源保护与利用。E-mail:1015190719@qq.com
基金资助:
国家重点研发计划专项（2017YFC1700705）；国家自然科学基金项目（81660625）；甘肃省高校协同创新科技团队支持计划项目（2016C-05FF09）

Received:2018-05-14 Published:2018-12-15 Online:2018-12-15

摘要/Abstract

摘要： 为探索当归（Angelica sinensis）药效成分阿魏酸生物合成中MYB蛋白的结构和功能，从当归中克隆转录因子基因MYB4，并进行序列分析和表达分析。根据MYB4转录因子的DNA保守结构域，结合同源克隆及RACE的原理，运用RT-PCR技术从当归中克隆MYB4基因cDNA的全长序列；利用生物信息学分析工具对该基因编码蛋白质的基本性质、结构特点及生物学功能进行初步预测；应用qRT-PCR分析该基因的表达特征；使用重组技术组装原核表达载体pGEX-4T-3-AsMYB4，热击法转化至大肠杆菌BL21（DE3），IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）诱导重组蛋白表达。结果表明，成功克隆1个MYB4基因，命名为AsMYB4，在GenBank中注册，登录号为MG736315；序列分析表明，AsMYB4的cDNA全长为1 189 bp，包括804 bp的开放阅读框，编码267个氨基酸，为典型的R2R3-MYB类转录因子家族成员；AsMYB4与胡萝卜MYB308的同源性达到93%，且亲缘关系最近。组织特异性表达分析表明，AsMYB4基因在当归叶片中的转录水平最高，分别是叶柄、根的1.1、2.0倍；异源表达分析表明，AsMYB4蛋白以包涵体形式存在，分子质量为30 ku。

关键词: 当归, 阿魏酸合成, MYB转录因子, 基因克隆, 表达分析

杨雪，雒军，杨彩霞，王振恒，夏琦，王引权. 当归MYB4转录因子基因的克隆及表达分析[J]. 河南农业科学, 2018, 47(12): 48-56.

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