河南农业科学 ›› 2018, Vol. 47 ›› Issue (11): 130-133.

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创伤弧菌FrsA蛋白的纯化及生化表征

鲍玲玲1,李至敏2,王小琴1,汤亚兰1,许文武1,李志敏1*   

  1. (1.江西农业大学 生物科学与工程学院,江西 南昌 330045;2.江西农业大学 理学院,江西 南昌 330045)
  • 收稿日期:2018-04-10 出版日期:2018-11-15 发布日期:2018-11-15
  • 通讯作者: 李志敏(1979-),男,江西新余人,副教授,博士,主要从事酶催化反应机制研究。E-mail:zmlizm@126.com
  • 作者简介:鲍玲玲(1995-),女,浙江湖州人,在读硕士研究生,研究方向:蛋白质工程。E-mail:1136803597@qq.com
  • 基金资助:
    江西省自然科学基金重大项目(20161ACB21012);江西省教育厅科技研究重点项目(GJJ160353);江西农业大学国家级大学生创新创业训练项目(201710410005)

  • Received:2018-04-10 Published:2018-11-15 Online:2018-11-15

摘要: 为确定创伤弧菌FrsA蛋白(VvFrsA)在大肠杆菌中的表达条件及体外纯化步骤,并对其进行生化表征分析。通过分子生物学手段将合成的创伤弧菌的FrsA基因(VvFrsA)连接到pET28a载体上,构建pET28a-VvFrsA原核表达载体。将该载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导实现了VvFrsA蛋白的可溶性表达。采用Ni-NTA亲和层析法纯化,得到重组VvFrsA蛋白。酶催化活性研究结果显示,VvFrsA具有酯酶功能,可以催化对硝基苯酚脂肪酸酯的水解,并且其最适底物为对硝基苯酚短链脂肪酸酯。综上,利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株成功表达了可溶性VvFrsA蛋白,并且VvFrsA体外具有催化对硝基苯酚脂肪酸酯水解活性。

关键词: 创伤弧菌, FrsA蛋白, 蛋白质纯化, 生化表征, 酯酶