河南农业科学 ›› 2018, Vol. 47 ›› Issue (11): 120-123.

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新发猪圆环病毒3型Cap蛋白的原核表达和纯化

连凯琪,周玲玲,张明亮,王英杰,张 慢,宋玉伟   

  1. (安阳工学院 生物与食品工程学院/河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站/河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室,河南 安阳 455000)
  • 收稿日期:2018-08-06 出版日期:2018-11-15 发布日期:2018-11-15
  • 作者简介:连凯琪(1987-),男,河南新蔡人,讲师,博士,主要从事动物传染病致病机制和免疫防控研究。 E-mail:liankaiqi616@163.com
  • 基金资助:
    安阳工学院博士科研启动基金项目(BSJ2016008)

  • Received:2018-08-06 Published:2018-11-15 Online:2018-11-15

摘要: 为制备新发猪圆环病毒3型(PCV-3)衣壳蛋白(Cap)的抗原,在大肠杆菌中表达Cap蛋白,并对其进行纯化。通过PCR扩增去除核定位信号区的Cap136—645基因,构建重组表达质粒pET30a(+)-Cap136—645,转化到E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,然后通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析进行鉴定,并纯化Cap136—645蛋白。结果表明,成功构建了pET30a(+)-Cap136—645重组表达质粒,且可在E.coli BL21(DE3)感受态细胞中可大量表达,表达的重组蛋白主要以包涵体形式表达,分子质量约为27.5 ku,纯化的蛋白质质量浓度高达1.28 μg/μL,且条带单一。

关键词: 猪圆环病毒3型, 包涵体, 原核表达, 蛋白质纯化