河南农业科学 ›› 2015, Vol. 44 ›› Issue (1): 121-125.

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新城疫病毒xx08株HN蛋白主要抗原区的原核表达及其在抗体检测中的应用

 涛1,2,孙国鹏1,王 丽3,李 鹏1,朱艳平1,王选年1,2*   

  1. 1.新乡学院 生物技术研究中心,河南 新乡 453003;2.河南科技学院 动物科学学院,河南 新乡 453003;3.河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州 450002
  • 收稿日期:2014-06-16 出版日期:2015-01-15 发布日期:2015-01-15
  • 通讯作者: 王选年(1969- ),男,河南灵宝人,教授,博士,主要从事动物病理学和分子免疫学研究。E-mail:wangxuannian@163.com。
  • 作者简介:阮涛(1986- ), 男,河南淮阳人,在读硕士研究生,研究方向:动物病理学和分子免疫学。E-mail:ruantao2006@126.com。
  • 基金资助:
     
    公益性行业(农业)科研专项(201303033);河南省教育厅科学技术研究重点项目(13A230841)

  • Received:2014-06-16 Published:2015-01-15 Online:2015-01-15

摘要: 为建立检测新城疫病毒(NDV)抗体的间接ELISA方法,构建了新城疫(ND)xx08株HN基因抗原表位集中区基因片段的重组表达质粒p ET28a-r HN,加入IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定表明,表达的重组蛋白大小约为28 ku。Western blot分析表明,该重组蛋白具有良好的反应性。以纯化的HN蛋白为包被抗原建立检测NDV抗体的间接ELISA方法,优化试验条件后,抗原最适包被浓度为5μg/m L,血清最适稀释比例为1∶80,与HI试验结果符合率较高,且与鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)、鸡传染性支气管炎病(IBV)、鸡禽流感病毒(AIV)和鸡马立克氏病毒(MDV)等标准阳性血清无交叉反应。表明建立的间接ELISA方法可以用于临床新城疫抗体的检测。 

关键词: 新城疫, HN蛋白, 原核表达, 鉴定, ELISA