河南农业科学 ›› 2018, Vol. 47 ›› Issue (4): 124-129.

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T-2毒素完全抗原制备及免疫学检测方法的建立

郉云瑞1,孙亚宁1,姚静静1,王英华2,郝慧芳1,柴书军1,李俊鹏3,胡骁飞1*   

  1. 1.河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州 450002; 2.河南省动物疫病预防控制中心,河南 郑州 450008; 3.平顶山农业科学院,河南平顶山 467000
  • 收稿日期:2017-11-24 出版日期:2018-04-15 发布日期:2018-04-15
  • 通讯作者: 胡骁飞(1972-),男,河南汝南人,研究员,博士,主要从事食品安全快速检测的研究。E-mail:huxf1972@126.com
  • 作者简介:邢云瑞(1990-),女,河南舞阳人,研究实习员,硕士,主要从事食品安全快速检测的研究。E-mail:xyrui1201@163.com
  • 基金资助:
    十二五国家科技支撑计划项目(2014BAD15B05);河南省农科院“四优四化”科技支撑行动计划项目

  • Received:2017-11-24 Published:2018-04-15 Online:2018-04-15

摘要:  为建立小分子霉菌毒素中T-2毒素残留的检测方法,合成并鉴定T-2毒素完全抗原,通过制备敏感性强的抗T-2毒素多抗血清,建立T-2毒素免疫学检测方法。采用N,N′-羰基二咪唑(CDI)法合成完全抗原T-2-BSA和包被原T-2-OVA,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和动物免疫试验对合成的完全抗原进行鉴定,优化ELISA反应条件,建立T-2毒素间接竞争ELISA检测方法。SDS-PAGE结果显示,完全抗原T-2-BSA合成成功;动物试验结果显示,制备的完全抗原能够刺激小鼠产生针对T-2毒素的特异性抗体;基于该抗体所建立的T-2毒素间接竞争ELISA检测方法的灵敏度(IC50)为8.34 ng/mL,检测限(LOD)为0.048 ng/mL。综上,成功合成了完全抗原T-2-BSA,获得了效价高、敏感性强的抗T-2毒素的鼠源多克隆抗体,并初步建立了T-2毒素免疫学检测方法。

关键词: T-2毒素, 完全抗原, 多克隆抗血清, ELISA