猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析

doi:10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.03.025

河南农业科学 ›› 2018, Vol. 47 ›› Issue (3): 128-133,143.DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.03.025

猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析

王冬雨，魏蔷，刘运超，刘畅，杨棋，崔颖磊，张改平

1.河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002；2.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室，河南郑州 450002；3.吉林大学动物医学学院，吉林长春130012；4.江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009

收稿日期:2017-11-16 出版日期:2018-03-15 发布日期:2018-03-15
通讯作者: 张改平（1960-）,男,河南内黄人,研究员,博士,主要从事动物免疫学及重大疫病快速检测技术研究。E-mail:zhanggaiping2003@163.com
作者简介:王冬雨（1993-）,男,河南郑州人,在读硕士研究生,研究方向:兽医免疫学。E-mail:1091509618@qq.com
基金资助:
河南省重大科技专项（141100110100）

Received:2017-11-16 Published:2018-03-15 Online:2018-03-15

摘要/Abstract

摘要： 为制备具有免疫原性的猪瘟病毒E2蛋白，应用在大肠杆菌表达E2蛋白，并对其进行纯化及免疫原性分析。将E2基因插入原核表达载体pET-28a，构建重组质粒pET-28a-E2，将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞进行诱导表达，SDS-PAGE电泳和Westernblot分析结果显示，成功表达了可溶性E2蛋白。对IPTG浓度及诱导温度和时间进行优化，结果显示，IPTG终浓度为0.1 mmol/L时，18 ℃条件下诱导表达20 h，E2蛋白的可溶表达量最高。通过分子筛一步纯化E2蛋白，其终质量浓度为0.5 g/L。Westernblot分析和间接ELISA结果显示，纯化后的E2蛋白在变性及非变性条件下都能够被猪瘟阳性血清特异性识别，表明纯化后的E2蛋白活性良好。将纯化后的E2蛋白添加弗氏佐剂乳化后免疫BALB/C小鼠，采集血清进行病毒中和试验，结果显示，免疫后56 d产生较高水平的中和抗体，表明E2蛋白免疫原性良好。综上，成功利用大肠杆菌BL21（DE3）菌株表达了可溶性E2蛋白，且纯化后的E2蛋白免疫原性良好。

关键词: 猪瘟病毒, E2蛋白, 蛋白质纯化, 血清学分析, 免疫原性

中图分类号:

S855.3

王冬雨，魏蔷，刘运超，刘畅，杨棋，崔颖磊，张改平. 猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析[J]. 河南农业科学, 2018, 47(3): 128-133,143.

参考文献

[1] Moennig V, Floegel-Niesmann G, Greiser-Wilke I. Clinical signs and epidemiology of classical swine fever: A review of new knowledge[J]. The Veterinary Journal, 2003, 165(1): 11-20. [2]许信刚,王丹,童德文.表达猪瘟病毒E2蛋白重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株的构建及动物免疫试验[J].中国兽医科学,2011,41(9):901-906. [3]范学政,徐璐,赵启祖,等.猪瘟兔化弱毒E2基因重组杆状病毒的构建及抗体制备[J].中国兽药杂志, 2015,49(1): 6-9. [4]Hammond JM，Jansen ES，MorrissyCJ，etal.用重组猪腺病毒口服或皮下接种后，保护猪免受经典猪瘟的“接触”攻击[J].病毒研究，2003，97（2）：151-157. [5]Sun S Q, Yin S H, Guo H C, et al. Genetic typing of classical swine fever virus isolates from China[J]. Transboundary and emerging diseases, 2013, 60(4): 370-375. [6]Sun Y, Liu D F, Wang Y F, et al. Generation and efficacy evaluation of a recombinant adenovirus expressing the E2 protein of classical swine fever virus[J]. Research in Veterinary Science, 2010, 88(1): 77-82. [7]Moormann R J, Van Gennip H G, Miedema G K, et al. Infectious RNA transcribed from an engineered full-length cDNA template of the genome of a pestivirus[J]. Journal of Virology, 1996, 70(2): 763-770. [8]Lin M, Trottier E, Mallory M. Enzyme-linked immunosorbent assay based on a chimeric antigen bearing antigenic regions of structural proteins Erns and E2 for serodiagnosis of classical swine fever virus infection[J]. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, 2005, 12(7): 877-881. [9]范学政,王琴,陈振海,等.猪瘟兔化弱毒株E2基因的原核表达及间接ELISA的初步建立[J].中国病毒学,2005,20(3):253-256. [10]李丽,陈弟诗,张毅等.猪瘟病毒及猪瘟疫苗的研究进展[J].当代畜牧,2014(24):48-49. [11]Lee N H, Lee J A, Park S Y, et al. A review of vaccine development and research for industry animals in Korea[J]. Clinical and Experimental Vaccine Research, 2012, 1(1): 18-34. [12]涂长春,王文成,余兴龙,等.猪瘟病毒DNA疫苗的田间免疫试验及环境生物安全评价[C].中华预防医学会.2005全国第二届核酸疫苗研讨会论文集.北京:[出版者不详],2005. [13]郭鹤.猪瘟病毒囊膜E2蛋白原核表达及初步应用研究[D].长春:吉林大学,2013. [14]刘伯华.猪瘟病毒E2基因在大肠杆菌中的高效表达及其表达产物的制备[D].长春:中国人民解放军军需大学,2002. [15]白羊,章永垒,邹有土,等.重组人βNGF在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定[J]. 生物技术通报,2016,32(11):202-207. [16]唐红慧.猪瘟兔化弱毒苗抗原量测定方法的探索及不同免疫程序的差异性比较研究[D].扬州:扬州大学, 2010. [17]Sorensen H P, Mortensen K K. Advanced genetic strategies for recombinant protein expression in Escherichiacoli[J]. Journal of Biotechnology, 2005, 115(2): 113-128. [18]杜立中,马霞,刘永录,等.黄芪多糖对猪瘟活疫苗免疫应答的佐剂作用[J].河南农业科学,2014,43(9):156-159. [19]郑旭升.乳猪用猪瘟兔化苗免疫失败原因浅探[J].畜牧与兽医,1982(2):88. [20]Yu X, Tu C, Li H, et al. DNA-mediated protection against classical swine fever virus[J]. Vaccine, 2001, 19(11): 1520-1525. [21]Wang Z, Nie Y, Wang P, et al. Characterization of classical swine fever virus entry by using pseudotyped viruses: E1 and E2 are sufficient to mediate viral entry[J]. Virology, 2004, 330(1): 332-341. [22]赵天生,张悦之,夏燕华.猪瘟病毒E(rns)蛋白RNase活性与免疫抑制功能的相关性研究[J].河南农业科学,2014,43(3):124-127,138. [23]田宏.猪水疱病和猪瘟基因工程亚单位疫苗的研究[D].杨凌:西北农林科技大学, 2006. [24]WensvoortG.Topographical and funcitional mapping of epitopes on hog cholera virus with monoclonal antibodies [J]. Journal of General Virology,1989,70(11):2865-2876. [25]Dong X N, Chen Y H. Candidate peptide-vaccines induced immunity against CSFV and identified sequential neutralizing determinants in antigenic domain A of glycoprotein E2[J]. Vaccine, 2006, 24(11): 1906-1913. [26]周景明,李鹏飞,张改平,等.猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及其可溶性分析[J].西北农业学报, 2015,24(11):24-28. [27]汪雪峰,董利阳,王钧,等.纳米材料与免疫系统的相互作用[J].江苏大学学报(医学版),2015,25(1):85-87,92. [28]姚晨婕. 纳米二氧化钛细胞毒性及免疫毒性机理研究[D].上海:上海大学,2016.

猪瘟病毒E2蛋白在大肠杆菌中的表达及免疫原性分析

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

[1]	陈甜梦, 蔡彤璇, 王嘉璐, 田牧野, 赵宝华, 刘东. 嗜水气单胞菌外膜蛋白TolB 的原核表达及生物信息学分析[J]. 河南农业科学, 2024, 53(2): 136-143.
[2]	孙雪珂, 丁培阳, 王思桥, 刘思源, 李明慧, 常泽杰, 陈艺兰, 李瑞琪, 张改平. 稳定表达猪δ 冠状病毒S1 蛋白CHO细胞系的构建与鉴定[J]. 河南农业科学, 2023, 52(6): 131-138.
[3]	陈维聪, 刘运超, 周川杰, 杨苏珍, 魏蔷, 柴书军, 张改平. 猪流行性腹泻病毒S1 蛋白的免疫原性评估[J]. 河南农业科学, 2022, 51(11): 127-134.
[4]	简思杰, 晁嘉, 孙薇, 陈锐, 丁锐, 陈琛, 刘祥. 嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA1182 的原核表达、纯化与免疫原性研究[J]. 河南农业科学, 2022, 51(11): 135-144.
[5]	耿笑林, 孙杰, 王彦伟, 黄甜, 刘鹏, 曹红梅, 逄文强, 郝丽影, 邓均华, 黄玉欣, 田克恭. 非洲猪瘟病毒K145R 蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备[J]. 河南农业科学, 2021, 50(8): 154-159.
[6]	任春晓, 冯华, 张腾, 蒋敏, 刘运超, 金前跃, 张改平. 中和表位串联的PCV2b 病毒样颗粒在昆虫细胞中的表达与鉴定[J]. 河南农业科学, 2021, 50(7): 154-160.
[7]	徐引弟, 焦文强, 王治方, 李海利, 张青娴, 朱文豪, 王克领. 鸡滑液囊支原体河南株的分离鉴定与生物学特性研究[J]. 河南农业科学, 2021, 50(7): 168-173.
[8]	王丽, 冯丽丽, 张雨杭, 孙亚宁, 杨继飞, 赵东, 王瑞宁, 李学伍, 郭军庆, 张改平. 猪瘟病毒E^rns/E2融合蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及评价[J]. 河南农业科学, 2021, 50(4): 154-161.
[9]	颜世君, 郝丽影, 白露露, 郑丁丁, 宋欢欢, 李胜强, 王同燕, 谭菲菲, 邓均华, 田克恭. 非洲猪瘟病毒p22 蛋白的表达及单克隆抗体制备[J]. 河南农业科学, 2021, 50(12): 149-154.
[10]	鲍印, 翟洪月, 李慧敏, 袁志乔, 马玉静, 丁雨善, 阚云超, 姚伦广, 田志军, 冷超粮. 豫西南猪主要病毒性传染病流行病学调查[J]. 河南农业科学, 2021, 50(1): 152-157.
[11]	李甜甜, 蒋大伟, 姬鹏超, 王银铃, 张改平. 传染性法氏囊病毒VP2蛋白的原核表达及其免疫效果评价[J]. 河南农业科学, 2020, 49(9): 136-142.
[12]	徐引弟, 张青娴, 王治方, 焦文强, 李海利, 朱文豪, 王克领. 猪肺炎支原体HNMhy1株免疫原性基因的鉴定与分析[J]. 河南农业科学, 2020, 49(9): 153-158.
[13]	李旭锋, 王垚, 金前跃, 周稳, 柴永笑, 陈晓, 丁培阳, 张改平. 新城疫病毒HN蛋白的酵母表达及其活性鉴定[J]. 河南农业科学, 2020, 49(3): 145-150.
[14]	魏蔷, 白怡霖, 柴书军, 刘运超, 宋亚鹏, 张改平. 猪瘟病毒E^rns蛋白在杆状病毒表达系统中的分泌表达及活性检测[J]. 河南农业科学, 2020, 49(2): 136-141.
[15]	白晶晶, 宋欢欢, 白晨雨, 郝丽影, 颜世君, 杜萌萌, 李向东, 邓均华, 田克恭. 非洲猪瘟病毒p17蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 河南农业科学, 2020, 49(12): 137-143.