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Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP1基因在昆虫细胞中的表达及鉴定

  

  1. 江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏 泰州 225300
  • 收稿日期:2017-07-20 出版日期:2018-01-15 发布日期:2018-01-15
  • 通讯作者: 王安平(1980-),女,江苏泰州人,副教授,博士,主要从事兽用生物制药的研究。E-mail:wap4017@163.com
  • 作者简介:顾玲玲(1990-),女,江苏泰州人,硕士,主要从事兽用生物制药的研究。E-mail:gull1118@163.com
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(31302096);江苏省农业支撑项目(BE2013415);江苏省六大人才高峰项目(NY-009)

  • Received:2017-07-20 Published:2018-01-15 Online:2018-01-15

摘要: 为在昆虫细胞中表达Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-Ⅰ)的主要结构蛋白VP1,根据GenBank已发表的DHAV-Ⅰ SH株VP1基因序列,设计1对特异性引物,通过RT-PCR扩增VP1基因,将其克隆至杆状病毒转移载体pFastBac1,获得重组杆状病毒转移载体pFB-VP1,将其转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经抗性、蓝白斑筛选及PCR鉴定后,构建重组穿梭质粒rBacmid-VP1。在脂质体介导下将重组质粒rBacmid-VP1转染昆虫细胞Sf 9,制备含有DHAV-Ⅰ VP1基因的重组杆状病毒rBac-VP1。Western blot结果显示,表达的重组蛋白VP1大小约27 ku,能与DHAV-ⅠVP1多克隆抗体发生特异性反应;间接免疫荧光检测结果显示,重组蛋白VP1能与DHAV-Ⅰ全病毒阳性血清发生特异性反应,细胞内出现较强的荧光。以上结果表明,在昆虫细胞中成功表达了具有免疫原性的DHAV-Ⅰ主要结构蛋白VP1。

关键词: Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒, VP1基因, 昆虫细胞, 表达, 鉴定