河南农业科学

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旱稻Tail-PCR技术主要影响因素的优化和验证

朱昀,李朝炜,刘嗣凡,刘颖,魏景芳   

  1. 河北科技大学,河北 石家庄 050018
  • 收稿日期:2017-08-03 出版日期:2018-01-15 发布日期:2018-01-15
  • 通讯作者: 朱昀(1979-),女,河北保定人,副教授,博士,主要从事植物基因工程与分子生物学研究。E-mail: xiaozhuhome@163.com
  • 作者简介:朱昀(1979-),女,河北保定人,副教授,博士,主要从事植物基因工程与分子生物学研究。
  • 基金资助:
    国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2016ZX08001003-006);河北科技大学五大平台开放基金课题(SW21,2015PT51);河北省高等学校科学技术研究项目(QN2017071)

  • Received:2017-08-03 Published:2018-01-15 Online:2018-01-15

摘要: 以转基因旱稻为材料,对Tail-PCR方法进行了分析优化,包括DNA样品质量、扩增产物稀释程度、酶的种类、简并引物组合方式、引物结合偏好性等。结果表明,DNA样品质量的高低是影响试验成功的重要因素,样品纯度不高导致扩增无法正常进行;扩增后对产物稀释不充分会影响下轮扩增效果,适当增大产物稀释倍数可在下轮扩增中增大出带可能;LA Taq酶与普通Taq酶相比扩增效果没有明显不同,使用普通Taq酶即可进行Tail-PCR扩增;混合简并引物在旱稻中并没有获得更好的扩增效果。此外,发现简并引物对于不同物种存在偏好性,常规4种简并引物与旱稻基因组均可高效结合。优化后的Tail-PCR技术结果稳定,重复性好,可以准确地获得转基因旱稻插入位点的旁侧序列。

关键词: 旱稻, Tail-PCR技术, 优化, 影响因素