哺乳动物促卵泡素氨基酸序列特征及其单克隆抗体的制备与鉴定

河南农业科学 ›› 2017, Vol. 46 ›› Issue (9): 139-143.

哺乳动物促卵泡素氨基酸序列特征及其单克隆抗体的制备与鉴定

李红飞，王军，王海花，李德印，叶晓敏，米俊宪

河南牧业经济学院动物医学院，河南郑州 450046

收稿日期:2017-03-22 出版日期:2017-09-15 发布日期:2017-09-15
作者简介:李红飞（1982-）,男，河南汝州人，讲师，博士，主要从事兽医产科学的教学与科研工作。E-mail:15136249092@163.com
基金资助:
河南省教育厅高等学校重点科研计划项目（16B230003）；河南牧业经济学院学术带头人培养计划项目（25000231）

Received:2017-03-22 Published:2017-09-15 Online:2017-09-15

摘要/Abstract

摘要： 为制备哺乳动物促卵泡素（FSH）单克隆抗体，比对了人类、家畜、部分野生动物、鼠类等哺乳动物FSH氨基酸序列，分析其种间同源性，结果发现,多种哺乳动物FSH β亚基氨基酸序列的同源性高于80%，且线性抗原表位高度保守。从奶牛垂体组织扩增FSH β亚基CDS片段，构建pET28a-FSH重组质粒，诱导表达FSH重组蛋白，免疫Balb/c小鼠，取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞孔，取效价最高孔进行克隆和亚克隆，获得1株能够分泌抗FSH的单克隆抗体细胞株，命名为B4A5。B4A5细胞株经过数次传代培养、反复冻融后生长状态良好，且能够稳定分泌抗体。采用细胞株体外培养和小鼠腹水诱生法均制备了抗FSH的单克隆抗体，其效价分别为1∶640、1∶10⁶。分别采用Western blot和间接ELISA法鉴定单克隆抗体的结合特异性和交叉反应性，结果显示，制备的单克隆抗体与FSH反应呈阳性，与促黄体素（LH）、促甲状腺素（TSH）、促乳素（PRL）、人绒毛膜促性腺激素（hCG）均无交叉反应性。综上，获得了1株能够稳定分泌单克隆抗体的

李红飞，王军，王海花，李德印，叶晓敏，米俊宪. 哺乳动物促卵泡素氨基酸序列特征及其单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 河南农业科学, 2017, 46(9): 139-143.

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