河南农业科学 ›› 2017, Vol. 46 ›› Issue (4): 143-146.

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N离子束注入与DES复合诱变选育腺苷高产菌株

刘国生1,2,李金鑫1,刘 磊1,谷艳昌3,许 航1   

  1. 1.河南师范大学 生命科学学院,河南 新乡 453007;      2.资源微生物与功能分子河南省高校重点实验室培育基地,河南 新乡 453007;   3.新乡拓新生化科技有限公司,河南 新乡 453000
  • 收稿日期:2016-12-26 出版日期:2017-04-15 发布日期:2017-04-15
  • 作者简介:刘国生(1964-),男,河南舞阳人,教授,博士,主要从事应用微生物学研究。E-mail:hnliugs@163.com
  • 基金资助:
    河南省高校科技创新团队支持计划项目(13IRTSTHN009);河南省教育厅自然科学基金项目(2011B180032)

  • Received:2016-12-26 Published:2017-04-15 Online:2017-04-15

摘要:

为了获得腺苷高产菌株,以肌苷产生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HSD1206(Ade-、Thi-、SGr)为出发菌株,通过硫酸二乙酯(DES)处理、N离子束注入进行单因子和复合诱变。参照菌种致死率曲线,确定N离子束注入250s与DES处理10 min为最佳诱变时间。经过多轮诱变和筛选,获得了黄嘌呤、硫胺素、组氨酸三重缺陷型,腺嘌呤脱氨酶活性缺失及磺胺胍抗性菌株DI4-24和DI4-182,其遗传标记为Xan-、Thi-、His-、Deam-、SGr,连续传代后性状稳定,在优化的发酵培养基中发酵后腺苷产量可分别达到18.56 g/L和17.13 g/L。由此证明,通过物理、化学复合诱变,阻断枯草芽孢杆菌营养缺陷型菌株产肌苷途径,打通合成腺苷途径的诱变思路在实验室环境下是可行的。

关键词: 腺苷; , 枯草芽孢杆菌; , 离子束注入; , 硫酸二乙酯; , 复合诱变; , 黄嘌呤缺陷型