耐有机溶剂脂肪酶基因lipI的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

河南农业科学 ›› 2013, Vol. 42 ›› Issue (6): 143-148.

耐有机溶剂脂肪酶基因lipI的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

王琰¹，张志敏¹*，王军¹，张琨¹，訾静¹，万一¹，王燕¹，张继生²，高建新³

1.陕西省微生物研究所，陕西西安 710043；2.西安新希望产业有限公司，陕西西安 710100；3.西安市动物疫病预防控制中心，陕西西安 710061

收稿日期:2012-12-29 出版日期:2013-06-15 发布日期:2013-06-15
通讯作者: 张志敏（1977-），女，河南许昌人，助理研究员，博士，主要从事微生物学方面的研究。E-mail：machenxibb@126.com 万一（1975-），男，河北昌黎人，副研究员，博士，主要从事基因工程药物开发方面的研究。E-mail：wanyi6565@sina.com
作者简介:王琰（1982-），女，河南荥阳人，助理研究员，硕士，主要从事微生物与分子生物学方面的研究。E-mail：900smile@163.com
基金资助:
陕西省科学院应用基础研究项目(2011K-14);中国科学院西部之光人才培养项目(2011DF02)

Received:2012-12-29 Published:2013-06-15 Online:2013-06-15

摘要/Abstract

摘要： 为了实现耐有机溶剂脂肪酶基因的真核表达,参照GenBank公布的脂肪酶基因序列设计简并引物,通过PCR扩增出G.geotrichumSXL-107的全长1 692bp、编码563个氨基酸的脂肪酶基因lipI,基因登录号为JX074060。利用Signal P 3.0软件对lipI基因序列进行分析,将去除自身信号肽的成熟lipI基因克隆到诱导型表达载体pPIC9K上,构建胞外重组表达载体pPIC9K li-pI,转化毕赤酵母KM71,发酵培养72h,发酵上清液中脂肪酶活力达到70U/mL,与野生型脂肪酶产生菌Galactomyces geotrichum SXL 107相比,脂肪酶活力提高7倍。获得的重组脂肪酶的最适温度40℃、pH值为6.5,在10%的甲醇溶液中作用48h后仍然保持60%以上的酶活力。

关键词: 耐有机溶剂, 脂肪酶基因, 毕赤酵母, 表达

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