河南农业科学 ›› 2008, Vol. 37 ›› Issue (12): 31-35.DOI: 10.3969/j.issn.1004-3268.2008.12.008

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棉花银染mRNA差异显示体系优化研究

代常波1;王清连2;胡根海2;郭敏敏1,2   

  1. 1河南师范大学生命科学学院,河南新乡453007;2河南科技学院生命科技学院,河南新乡453003
  • 出版日期:2008-12-15 发布日期:2008-12-15
  • 基金资助:
    国家科技支撑计划(2006BAD01A05-27);河南省自然科学基金项目(0411034100)

  • Published:2008-12-15 Online:2008-12-15

摘要: mRNA差异显示技术(DDRT—PCR)是分离差异表达基因的有效方法。以陆地棉组织培养过程中不同时期愈伤组织为材料,对RNA提取、PCR反应体系、银染条件等影响mRNA差异显示的关键因素进行优化试验,建立了一套适合棉花组织培养的mRNA差异显示体系。最终确定了优化体系(50μL)为:随机引物0.4μmol/L,锚定引物0.4μmol/L,dNTP 250μmol/L,Mg^2+ 1.5mmol/L,Taq酶1.5U,退火温度为39.3℃。利用优化后的体系对材料进行扩增,扩增产物特异性好、条带清晰、背景干净。该体系简便、快捷、灵敏、高效,可用于分离差异表达基因。

关键词: 棉花, 愈伤组织, 体系优化, MRNA差异显示, 银染

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