猪圆环病毒Ⅱ型河南地方株ORF3的克隆及原核表达

河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (10): 123-126,140.

猪圆环病毒Ⅱ型河南地方株ORF3的克隆及原核表达

郑鸣, 李华玮, 边传周, 王永芬, 王老七*

河南牧业经济学院，河南郑州，450011

收稿日期:2014-05-20 出版日期:2014-10-15 发布日期:2014-10-15
通讯作者: 王老七（1973-），河南中牟人，副教授，硕士，主要从事猪病防控及猪场管理研究。E-mail:tianyigaoke@163.com
作者简介:郑鸣(1975-)，男，河南固始人，讲师，硕士，主要从事畜禽疾病防治及诊断技术的研究。E-mail: floatingzm@163.com
基金资助:
河南省高等学校青年骨干教师资助计划项目（2011GGJS-192）

Received:2014-05-20 Published:2014-10-15 Online:2014-10-15

摘要/Abstract

摘要： 为获得猪圆环病毒Ⅱ型ORF3编码蛋白,研究该蛋白的特性及功能,根据GenBank数据库中PCVⅡ的基因组序列设计引物,利用PCR从病料基因组DNA中扩增PCVⅡ河南地方株ORF3,将其克隆至表达载体pET-32a中进行诱导表达,SDS-PAGE电泳检测重组蛋白表达情况,采用Ni+NTA亲和纯化表达产物,透析复性后免疫日本大白兔制备多抗血清,并采用ELISA和Western blot方法检测多抗血清的效价和特异性。结果显示,PCR扩增获得全长315bp的ORF3,重组质粒经测序和双酶切证实构建正确;SDS-PAGE结果显示,ORF3能够在大肠杆菌中表达,产物的分子量约为30ku,以包涵体形式存在;纯化的重组蛋白具有较好的抗原性,制备的多抗血清抗体效价达1∶12 800以上,抗体特异性高,能与表达的ORF3编码蛋白结合。成功克隆了PCVⅡ河南地方株ORF3并实现原核表达,获得纯化的重组ORF3编码蛋白。

关键词: 猪圆环病毒Ⅱ型, ORF3, 原核表达, 多抗血清

郑鸣, 李华玮, 边传周, 王永芬, 王老七?. 猪圆环病毒Ⅱ型河南地方株ORF3的克隆及原核表达[J]. 河南农业科学, 2014, 43(10): 123-126,140.

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