河南农业科学 ›› 2015, Vol. 44 ›› Issue (12): 126-129.

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延边白鹅IFN-γ基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

张 颖,刘恩平,陈海迪,高 旭*,张立媛,于清洋,鲁 承,梁晚枫   

  1. 延边大学 动物医学系,吉林 延吉 133400
  • 收稿日期:2015-07-10 出版日期:2015-12-15 发布日期:2015-12-15
  • 通讯作者: 高 旭(1977-),男,吉林德惠人,副教授,博士,主要从事动物病毒分子生物学与免疫学研究。E-mail:ybuac@126.com
  • 作者简介:张 颖(1987-),女,吉林通化人,在读硕士研究生,研究方向:动物传染病学。E-mail:187120784@qq.com 刘恩平为共同第一作者。
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(31460661);延边大学第六届大学生科研项目(20130108)

  • Received:2015-07-10 Published:2015-12-15 Online:2015-12-15

摘要: 为制备抗延边白鹅IFN-γ蛋白的多克隆抗体,以已制备的pMD-IFN-γ质粒为模板,通过PCR扩增到延边白鹅IFN-γ基因,经TA克隆和BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,将目的基因亚克隆至pGEX-4T-1原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),进行 IPTG诱导表达,将经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确的重组蛋白用GST标签纯化试剂盒纯化,以纯化的重组蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体并进行ELISA检测。结果显示,成功构建了原核表达载体pGEX-IFN-γ,表达的重组蛋白以包涵体形式存在,分子质量约为43 ku,制备的小鼠抗IFN-γ多克隆抗体效价为 1∶16 000。

关键词: 延边白鹅,  , IFN-&gamma, 基因, 原核表达, 多克隆抗体