河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (7): 150-155.

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苯乙醇胺A人工抗原的制备与鉴定

  

  1.   (1.河南省农业科学院 农业部动物免疫学重点开放实验室,河南 郑州450002;2.河南科技大学 食品与生物工程学院,河南洛阳471003;3.河南农业大学 牧医工程学院,河南 郑州450000)
  • 收稿日期:2014-01-09 出版日期:2014-07-15 发布日期:2014-07-15
  • 通讯作者: 邓瑞广(1960-),男,河南平顶山人,研究员,硕士生导师,主要从事动物疫病和食品安全快速检测技术研究。E-mail:rgd999@163.com
  • 作者简介:蔡齐超(1989- ),男,河南商丘人,在读硕士研究生,研究方向:食品安全检测。Email:01270037abc@163.com
  • 基金资助:
    农业部公益性行业(农业)科研专项(201203040);河南省扶持企业自主创新资金项目(2013YQ29)

  • Received:2014-01-09 Published:2014-07-15 Online:2014-07-15

摘要: 为合成苯乙醇胺A人工抗原,并制备出鼠源苯乙醇胺A多抗血清,采用琥珀酸酐法改造苯乙醇胺A,应用活化脂法(DCC)和碳二亚胺法(EDC)与载体蛋白相连 ,合成人工免疫原苯乙醇胺A–BSA和检测原苯乙醇胺A–OVA,并用紫外扫描光谱法、凝胶电泳法(SDS–PAGE)和酶联免疫吸附法(ELISA) 鉴定偶联结果 。结果显示,在紫外扫描光谱下,合成的免疫原在276 nm处出现最大吸收峰;SDS–PAGE电泳发现,免疫原出现明显的拖尾现象;按10 µg/只 只的剂量免疫小鼠, 共免疫4次,每次间隔3周,最后1次免疫10 d后,断尾采血,经测定,得到的多抗血清的效价均达到1︰10 000,且1号小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度IC50)为536.8 ng/mL,与其他药物的交叉反应率均小于0.5%,具有很好的特异性。成功合成了苯乙醇胺A人工抗原,并得到了敏感性高、特异性好的多抗血清。

关键词: 苯乙醇胺A, 人工抗原, 多抗血清, 酶联免疫吸附法