河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (3): 116-120.

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桃不同发育时期叶片总RNA提取方法的比较

王其海1,王裔娜1,刘晓华1,吴文江2,丁 宁1,牛洪斌3,王林忠1,吴国良1   

  1. 1.河南农业大学 园艺学院,河南 郑州 450002;2.河南农业大学 食品科技学院,河南 郑州 450002;3.河南农业大学 国家小麦工程技术研究中心,河南 郑州 450002
  • 收稿日期:2013-10-18 出版日期:2014-03-15 发布日期:2014-03-15
  • 通讯作者: 吴国良(1958-),男,山西万荣人,教授,博士生导师,主要从事果树生理、种质资源及分子生物学方面的教学与科研工作。E-mail:walnut-wu@126.com
  • 作者简介:王其海(1987-),女,河南安阳人,在读硕士研究生,研究方向:果树分子生物学。E-mail:wqhthankyou@163.com
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(31171943);河南省重大科技攻关项目(92101110600)

  • Received:2013-10-18 Published:2014-03-15 Online:2014-03-15

摘要:  为了从桃叶片中提取到高质量的RNA,以进行反转录、RT-PCR等后续分子生物学试验,选取了改良硼砂-CTAB法、改良CTAB法、改良SDS-苯酚法、试剂盒法、Trizol法,以及在试验中探索的改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ对桃不同发育时期的叶片总RNA进行提取,测定RNA样品的OD值,结合琼脂糖凝胶电泳检测总RNA样品的质量。结果表明,这些方法虽然都能获得桃叶片总RNA,但是或存在不同程度的DNA残留,或有蛋白、多糖等杂质污染,或降解严重;而改良的Trizol法提取总RNA的完整性和纯度较好;针对生长期和衰老期叶片的不同生理特性可分别采用改良Trizol法Ⅰ和改良Trizol法Ⅱ,提取的总RNA反转录后,通过RT-PCR检测,条带明亮清晰,与预期目的基因片段大小一致,说明这2种方法提取的总RNA能用于后期的分子生物学试验。 

关键词: 桃叶片, RNA提取, Trizol法, 改良CTAB法, 改良SDS-苯酚法