河南农业科学 ›› 2015, Vol. 44 ›› Issue (8): 121-127,140.

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1株犬细小病毒的分离鉴定及其生物学特性研究

卜 宾1,李生涛2,毛倩倩1,唐青海1*,唐存多1,焦铸锦1,姚伦广1,阚云超1*   

  1. 1.南阳师范学院南阳市兽医生物工程技术研究中心 河南省伏牛山昆虫生物学重点实验室 昆虫生物反应器河南省工程实验室,河南 南阳 473061;2.南阳农业职业学院,河南 南阳 473061
  • 收稿日期:2015-03-19 出版日期:2015-08-15 发布日期:2015-08-15
  • 通讯作者: 唐青海(1982-),男,湖南祁阳人,助理研究员,主要从事病毒分子生物学研究。E-mail:qinghaitang109@126.com 阚云超(1974-),男,河南南阳人,教授,主要从事生物制药与疫苗工程研究。E-mail:kanyunchao@163.com
  • 作者简介:卜宾(1989-),男,河南南阳人,在读硕士研究生,研究方向:生物制药与疫苗工程研究。E-mail:15303777128@163.com
  • 基金资助:
     
    国家自然基金青年基金项目(31101837);河南省重点科技攻关项目(142102110101);南阳师范学院引进人才专项项目(70640);南阳师范学院研究生创新基金项目(20141101,2014103)

  • Received:2015-03-19 Published:2015-08-15 Online:2015-08-15

摘要:  

采集一疑似犬细小病毒(CPV)患犬的粪便,采用胶体金试纸条和PCR方法对病料进行CPV检测,并应用猫肾细胞F81进行病毒分离培养,分别采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)和PCR检测病毒在F81细胞中的增殖动态,采用无血清培养和有血清培养2种方法进行体外培养,IPMA测定病毒滴度。利用PCR扩增分离病毒的VP〖STBX〗2〖STBZ〗基因,经序列测定后采用DNAStar 7.0和MEGA 5.0软件进行生物信息学分析。结果表明,胶体金试纸条检测为CPV抗原阴性,PCR检测结果为CPV核酸阳性,病料接种到F81细胞培养后出现明显细胞病变(CPE),血清学鉴定为CPV抗原阳性,将分离得到的病毒命名为CPV-NY130615。IPMA可从感染后6 h的 F81细胞中检出病毒,PCR能从感染后6 h培养上清中检出CPV核酸。血清同步接种培养法培养和无血清单层接种培养法培养的第15代病毒滴度分别为1×108.06 TCID50/mL和1×107.65 TCID50/mL。序列测定分析表明,该毒株VP2基因开放阅读框(ORF)为1 755 bp,编码584 aa。进化分析显示,该毒株属于CPV-2a型。

关键词: 犬细小病毒, 分离, 免疫过氧化物酶单层细胞染色法, 生物学特性