河南农业科学 ›› 2012, Vol. 41 ›› Issue (4): 113-116.

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山茱萸RAPD反应体系的正交优化研究

叶 凡,李开言,王亚芹,鲁阳芳,麻光磊,刘青蓝,任雪玲*   

  1. 郑州大学 药学院 河南 郑州 450001
  • 收稿日期:2011-12-10 出版日期:2012-04-15 发布日期:2012-04-15
  • 通讯作者: 任雪玲(1975-),女,河南鹤壁人,副教授,博士,硕士生导师,主要从事药物分子生物学研究。E-mail:drs1998@126.com
  • 作者简介:叶 凡(1966-),女,河南郑州人,实验师,主要从事药物分析方面的研究。E-mail:likaiyan_0917_2006@126.com
  • 基金资助:
     国家级大学生创新性实验计划项目(101045902)

  • Received:2011-12-10 Published:2012-04-15 Online:2012-04-15

摘要:  为了优化山茱萸RAPD反应条件,采用改良CTAB法提取山茱萸基因组DNA,并采用三因素三水平正交试验对RAPD反应体系中Mg2+、dNTP、引物浓度进行初步优化,在此基础上,对温度条件进一步优化。结果表明:在25μL的RAPD反应体系中各因素的最佳浓度分别为1.925mmol/L Mg2+、0.275mmol/L dNTPs、0.55μmol/L引物、DNA模板40ng和1UTaq DNA聚合酶;引物Tm为36.9℃时,最佳退火温度为35℃;引物Tm为41.0℃时,最佳退火温度为38℃。在最优反应条件下,对100种随机引物进行RAPD扩增,其中93种随机引物均扩增出条带,建立了可靠的反应体系和反应程序,为山茱萸的DNA指纹图谱鉴定建立了基础。 

关键词: 山茱萸, 正交优化, 随机引物扩增多态性DNA, DNA指纹图谱