河南农业科学 ›› 2012, Vol. 41 ›› Issue (3): 142-145.

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碳二亚胺法制备阿莫西林人工抗原及其鉴定

刘庆堂1,王 磊1,2,职爱民1, 滕 蔓1,胡骁飞1,孙亚宁1,2,宋春美1,3, 王寅彪1,张改平1*   

  1. 1. 河南省农业科学院 农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室,河南 郑州 450002;2.河南科技大学 食品与生物工程学院,河南 洛阳471003;3.江南大学 食品学院,江苏 无锡 214122
  • 收稿日期:2011-09-03 出版日期:2012-03-15 发布日期:2012-03-15
  • 通讯作者: 张改平(1960-),男,河南内黄人,中国工程院院士,研究员,博士,博士生导师,主要从事动物免疫学及食品安全研究,E-mail:zhanggaiping2003@yahoo.com.cn
  • 作者简介:刘庆堂 (1970-),男,河南内黄人,主要从事动物性食品安全生物技术研究。E-mail:lqt29915@yahoo.com.cn
  • 基金资助:
     公益性行业(农业)科研专项(201003008)

  • Received:2011-09-03 Published:2012-03-15 Online:2012-03-15

摘要:  合成、鉴定了阿莫西林(amoxicillin,AMO)人工抗原,并通过动物免疫法生产了亲和力高、特异性好的鼠源AMO多克隆抗血清。采用碳二亚胺(EDC)法将AMO分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,合成完全免疫抗原AMO-BSA和检测抗原AMO-OVA,经紫外分光光度法和SDS-PAGE以及动物免疫进行鉴定。结果表明,偶联后的紫外吸收峰与BSA和AMO相比都发生了一定的位移,AMO-BSA在276nm处出现最大吸收峰,BSA的泳动速度大于AMO-BSA。免疫后获得的3只小鼠多抗血清,通过间接竞争ELISA测定,效价可达1×10-4以上,1号小鼠半数抑制浓度(IC50)为573.75ng/mL,敏感性较好。AMO完全人工抗原的合成以及鼠源多克隆抗体血清的制备,为AMO单克隆抗体的制备奠定了基础。

关键词: 阿莫西林, 人工抗原, 合成, 多克隆抗体, 碳二亚胺法