河南农业科学 ›› 2014, Vol. 43 ›› Issue (5): 124-129.

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文心兰OnAP1-like基因表达载体构建和遗传转化体系初探

  

  1. 1.河南农业大学 生命科学学院,河南 郑州 450002;2.郑州师范学院 生物工程研究所,河南 郑州 450044
  • 收稿日期:2013-11-22 出版日期:2014-05-15 发布日期:2014-05-15
  • 通讯作者: 叶永忠(1957-),男,湖北黄梅人,教授,博士生导师,主要从事植物生态学方面的研究。E-mail: yeyzh@163.com
  • 作者简介:武振江(1985-),男,河南滑县人,在读硕士研究生,研究方向:兰花分子育种。E-mail: 8125528xy@163.com
  • 基金资助:
    河南省重点科技攻关项目(092102110128);郑州市重大科技专项(112PZDZX030)

  • Received:2013-11-22 Published:2014-05-15 Online:2014-05-15

摘要: 根据NCBI网站上文心兰OnAP1-like基因序列设计引物,用RT-PCR法从南茜文心兰花葶中扩增OnAP1-like基因,对扩增产物进行测序。结果表明,获得的南茜文心兰OnAP1-like基因为690bp,与报道序列完全一致。将OnAP1-like基因插入pRI101-ON载体中,经PCR、双酶切及测序鉴定,证实重组表达质粒中含有目的片段,表明成功构建了高效植物表达载体pRI101-OnAP1。对OnAP1-like基因的结构域和所表达蛋白质的亲水性进行了分析,并预测了该基因所表达蛋白的三维结构。结果显示,该基因包含MADS-box和K-box保守域,属于MADS-box基因家族,所表达蛋白为亲水性蛋白。确定了一种文心兰的遗传转化条件,得到筛选抗生素G418的最适质量浓度为40 mg/L,为进一步研究文心兰中AP1基因的功能奠定基础。 

关键词: 文心兰, 载体构建, OnAP1基因, 遗传转化体系