河南农业科学 ›› 2012, Vol. 41 ›› Issue (1): 65-68.

• 农业资源与环境 • 上一篇    下一篇

土壤微生物总DNA的V3可变区PCR反应体系优化

殷全玉1,2,郭夏丽1,赵铭钦2,王岩1*   

  1. 1.郑州大学 化工与能源学院,河南 郑州 450001;2.河南农业大学 烟草学院,河南 郑州 450002
  • 收稿日期:2011-07-21 出版日期:2012-01-15 发布日期:2012-01-15
  • 通讯作者: 王岩(1963-),男,河南台前人,教授,博士生导师,主要从事环境生物与生态方面的研究。E-mail:wangyan371@zzu.edu.cn
  • 作者简介:殷全玉(1975-),女,河南固始人,讲师,博士,主要从事烟草化学与品质生态研究。E-mail:quanyuy@126.com
  • 基金资助:
    吉林省烟草工业有限责任公司重大科技攻关项目(JY2006012)

  • Received:2011-07-21 Published:2012-01-15 Online:2012-01-15

摘要: 为了优化以土壤微生物DNA为模板的PCR反应条件,采用E.Z.N.A.soil DNA kit试剂盒提取土壤微生物总DNA,对16SrDNA V3可变区的PCR反应体系和反应条件进行优化。主要从DNA模板用量、引物浓度、退火温度、热启动方式4个方面进行筛选试验,最后得出最适宜的土壤DNA扩增体系为:10.5ng模板DNA、5μL 10×buffer、4μL 2.5mmol/L dNTP、10μmol/L引物各1.5μL,2.5UTaq酶,加无菌ddH2O补足至50μL;PCR循环程序为:94℃预变性5min;94℃变性1min,52℃退火1min,72℃延伸70s,29个循环;72℃延伸5min。试验结果表明:选择热启动方式和合适的退火温度是获得高质量PCR产物的关键。 

关键词: 土壤微生物DNA, 16S rDNA, V3区, PCR扩增, 优化, 热启动方式, 退火温度